查氏培养基的基本原理

（1）查氏培养基的基本原理

基本原理：培养基是人工按一定比例配制的供微生物生长繁殖和合成代谢产物所需要的营养物质的混合物，培养基的原材料可分为碳源、氮源、无机盐、生长因素和水，根据微生物的种类和实验目的不同，培养基也有不同的种类和配制方法；

牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基，由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供微生物生长繁殖之用。

（2）最先创用固体培养基的科学家是

科赫，伟大的德国医学家。诺贝尔医学和生理学奖获得者。生于1843年，1866年毕业于德国哥廷根大学医学院。1910年5月27日，离开了人世。

科赫创立的微生物学方法一直沿用至今，为微生物学作为生命科学中一门重要的独立分支学科奠定了坚实的基础。科赫首创的显微摄影留下的照片在今天也是高水平的。这些技术包括分离和纯培养技术、培养基技术、染色技术等。

（3）MRS培养基的配方

MRS培养基是用于食品中乳酸菌检测的。

配方：

1、成分：10g蛋白陈、5g牛肉粉、4g酵母粉、2g葡萄糖、1ml吐温80、2g磷酸氢二钾、5g乙酸钠、2g柠檬酸三铵、0.2g硫酸镁、0.05g硫酸锰、15g琼脂粉、1000ml蒸馏水。

2、制法：

将上述成分加入蒸馏水中，加热溶解，校正ph6、2，分装后121摄氏度高压灭菌15分钟到20分钟。

（4）培养基的配制方法

1、配制用水

培养基的大部分是水，所以水的质量直接影响培养基的质量。按Waymouth标准，水的电阻应为200万欧姆，一般实验室里以玻璃蒸馏器制备的

双蒸水或三蒸水可以符合使用条件。

2、培养基

培养基有天然、人工两种。一般实验室使用的是RPMI-1640粉末培养基，以双蒸或三蒸水配制。NaHCO3（或HCl）调pH至7.2-7.4，若pH值超过7.6或远低于6.8，则大多数细胞不能生长。RPMI-1640不耐高压灭菌，使用前需经灭菌0.22μm孔径滤膜滤过处理。

3、血清

培养中常使用小牛血清（或胎牛血清）。血清亦不能高压灭菌，无菌的小牛血清需在56℃水浴30分钟灭活补体，置4℃冰箱存放待用。配制时含量视培养细胞种类、时间而定，一般用10—15%。由于血清成分复杂、条件不易控制，可选用无血清培养基。

4、抗菌素

为防止培养时期细菌的污染，可在培养基中添加适当抗菌素，一般用量与组织细胞培养相同：卡那霉素100单位/毫升，或双抗--青霉素100单位/毫升，链霉素100微克/毫升。

5、植物血凝素（PHA）

非增殖期的细胞不能制备染色体，如人外周血淋巴细胞，但在离体培养过程中，在PHA的作用下，可被刺激转化为淋巴母细胞而进入有丝分裂。

经实验测定其分裂高峰分别于培养后44-48小时和68-72小时。

PHA有粘多糖，蛋白质两种重要成分。粘多糖促使有丝分裂，蛋白质起凝集作用。PHA激活的细胞数随其浓度而增加，直至全部免疫活性细胞均

被激活为止，但PHA浓度过高会引起凝集，一般采用4%浓度为好。

（5）沙氏培养基与营养培养基的区别

沙氏培养基是用于真菌的培养，多数细菌不能在其中生长。营养琼脂则多用于培养营养要求不高的细菌，或者用于菌落计数。两种培养基的成分自然也是不同的。

营养培养基在基础培养基中可加入葡萄糖、血液、生长因子等特殊成分，供营养要求较高的细菌和需要特殊因子的细菌生长。最常用的是血琼脂平板、巧克力平板等。

沙氏培养基：蛋白胨10克、琼脂 20克、葡萄糖40克，加蒸馏水定容至1升，115摄氏度20分钟高压蒸汽灭菌，作分离培养霉菌用。

关键词： 培养基 基本 原理