培养基的灭菌流程

(1)培养基的灭菌流程

培养基的灭菌流程如下：

1、使用前在外层锅内加入适量的水，水量与三角搁架相平；

2、将内锅放在三角搁架上，培养基分装完毕后将待灭菌的物品放在内锅里，将盖上的排气软管插到内锅的排气槽内，然后将锅四周的固定螺旋以两两对称的方式旋紧，打开排气阀；

3、加热井的同时打开排气阀，待锅内沸腾并有大量蒸汽自排气阀冒出时，维持5分钟以上，然后将排气阀关闭；

4、当压力升至0.1兆帕，温度达到121摄氏度时，维持20到30分钟后，隔断热源；

5、出锅当压力表降至零处后，打开排气阀，旋开固定螺旋，开盖，取出灭菌物；

6、灭菌完毕取出物品后，将锅内余水倒出，保持内壁及搁架干燥，盖好锅盖即可。

(2)沙氏培养基与营养培养基的区别

沙氏培养基是用于真菌的培养，多数细菌不能在其中生长。营养琼脂则多用于培养营养要求不高的细菌，或者用于菌落计数。两种培养基的成分自然也是不同的。

营养培养基在基础培养基中可加入葡萄糖、血液、生长因子等特殊成分，供营养要求较高的细菌和需要特殊因子的细菌生长。最常用的是血琼脂平板、巧克力平板等。

沙氏培养基：蛋白胨10克、琼脂 20克、葡萄糖40克，加蒸馏水定容至1升，115摄氏度20分钟高压蒸汽灭菌，作分离培养霉菌用。

(3)培养基的配制方法

1、配制用水

培养基的大部分是水，所以水的质量直接影响培养基的质量。按Waymouth标准，水的电阻应为200万欧姆，一般实验室里以玻璃蒸馏器制备的

双蒸水或三蒸水可以符合使用条件。

2、培养基

培养基有天然、人工两种。一般实验室使用的是RPMI-1640粉末培养基，以双蒸或三蒸水配制。NaHCO3（或HCl）调pH至7.2-7.4，若pH值超过7.6或远低于6.8，则大多数细胞不能生长。RPMI-1640不耐高压灭菌，使用前需经灭菌0.22μm孔径滤膜滤过处理。

3、血清

培养中常使用小牛血清（或胎牛血清）。血清亦不能高压灭菌，无菌的小牛血清需在56℃水浴30分钟灭活补体，置4℃冰箱存放待用。配制时含量视培养细胞种类、时间而定，一般用10—15%。由于血清成分复杂、条件不易控制，可选用无血清培养基。

4、抗菌素

为防止培养时期细菌的污染，可在培养基中添加适当抗菌素，一般用量与组织细胞培养相同：卡那霉素100单位/毫升，或双抗--青霉素100单位/毫升，链霉素100微克/毫升。

5、植物血凝素（PHA）

非增殖期的细胞不能制备染色体，如人外周血淋巴细胞，但在离体培养过程中，在PHA的作用下，可被刺激转化为淋巴母细胞而进入有丝分裂。

经实验测定其分裂高峰分别于培养后44-48小时和68-72小时。

PHA有粘多糖，蛋白质两种重要成分。粘多糖促使有丝分裂，蛋白质起凝集作用。PHA激活的细胞数随其浓度而增加，直至全部免疫活性细胞均

被激活为止，但PHA浓度过高会引起凝集，一般采用4%浓度为好。

(4)MRS培养基的配方

MRS培养基是用于食品中乳酸菌检测的。

配方：

1、成分：10g蛋白陈、5g牛肉粉、4g酵母粉、2g葡萄糖、1ml吐温80、2g磷酸氢二钾、5g乙酸钠、2g柠檬酸三铵、0.2g硫酸镁、0.05g硫酸锰、15g琼脂粉、1000ml蒸馏水。

2、制法：

将上述成分加入蒸馏水中，加热溶解，校正ph6、2，分装后121摄氏度高压灭菌15分钟到20分钟。

(5)基本培养基和完全培养基的区别

基本培养基；仅能满足微生物野生型菌株生长需要的培养基，成为基本培养基。完全培养基；凡可满足一切营养缺陷型菌株营养需要的天然或者半天然培养基，成为完全培养基。

补充培养基：凡是只能满足相应的营养缺陷型生长需要的组合培养基，称为补充培养基，是在基本培养基中加入该菌株不能合成的营养因子而组成的。

关键词： 培养基 灭菌 流程